Войти Присоединиться

Криоконсервация половых клеток и эмбрионов

В современную эпоху стремительного развития вспомогательных репродуктивных технологий криоконсервация гамет и эмбрионов является клинически значимым методом повышения кумулятивной частоты наступления беременности. При проведении стандартной процедуры стимуляции овуляции и оплодотворения ооцитов in vitro более чем в 60% случаев после выполнения переноса остаются эмбрионы, пригодные для замораживания.

Таким образом, криоконсервация создает возможность продолжения лечения в случае ненаступления беременности в стимулированном цикле. Криоконсервированные эмбрионы могут быть разморожены и перенесены в матку пациентки в последующих циклах, не требующих использования дорогостоящих гормональных схем стимуляции суперовуляции.

Другим явным преимуществом криоконсервации безусловно является возможность отмены в стимулированном цикле переноса эмбрионов в случае развития у пациентки синдрома гиперстимуляции тяжелой степени, а также при возникновении факторов риска нарушения имплантации (кровотечение, недостаточность секреторной трансформации и полипы эндометрия, а также экстремально трудный перенос эмбрионов).

Криоконсервация

Процесс, в котором половые клетки и эмбрионы подвергаются воздействию криопротекторов, охлаждению до температуры жидкого азота (-196°С), хранению при этой температуре с последующим размораживанием, удалением криопротекторов и возвращением ооцитов и эмбрионов в физиологическую среду для дальнейшего роста и развития. Около 90% воды в клетке - это свободная вода, которую нужно безопасно удалить в процессе криоконсервации и предотвратить повреждение клеток формирующимися кристаллами льда. Именно в этом и состоит основная роль криопротекторов – защитить клетки от повреждения льдом. Криопротекторы не только уменьшают скорость формирования кристаллов, но и модифицируют (сглаживают) их форму.

Процедура криоконсервации предполагает подавление всех внутриклеточных химических реакций при низкотемпературном хранении в жидком азоте. По произведенным расчетам потребуются сотни лет прежде, чем фоновая ионизирующая радиация на планете Земля приведет к серьезным повреждениям хранящихся эмбрионов.

Методы криоконсервации можно разделить на две основных группы: медленное замораживание и витрификация. По способу хранения и размораживания эти две процедуры мало различаются между собой, главное отличие состоит в концентрациях используемых криопротекторов и скорости охлаждения. При медленном замораживании используют низкие концентрации криопротекторов, эмбрионы и ооциты помещают в пластиковые мини-соломинки и охлаждают в программируемом замораживателе. Контролируемое медленное охлаждение со скоростью 0,3°С/мин продолжается до -30º...-37ºC, после чего соломинки переносят непосредственно в жидкий азот для хранения.

Первые беременности после переноса в полость матки пациентки криоконсервированных дробящихся эмбрионов и бластоцист были получены в 1983 году и 1985 году с использованием методов традиционного медленного замораживания.

Витрификация

Метод быстрого охлаждения живых систем с использованием высоких концентраций криопротекторов. Термин витрификация происходит от латинского слова vitreous (glassy, glass-like-стеклоподобный). В процессе витрификации растворы криопротекторов обратимо переходят в аморфное некристаллическое стекловидное состояние. Высокая скорость охлаждения и последующего отогревания полностью исключает повреждения, обусловленные формированием кристаллов внутриклеточного льда. Это быстрый, технически простой метод, при котором эмбрионы первоначально помещают в буфер с одним или двумя криопротекторами, а затем непосредственно в жидкий азот.

Метод не требует использования программируемого криооборудования и обеспечивает высокую выживаемость замораживаемых объектов. В 1986 году были опубликованы результаты первой успешной витрификации ооцитов человек. С 90-х годов 20-го столетия появляется целый ряд сообщений о наступлении первых беременностей после переноса витрифицированных эмбрионов 2-3 дня развития, на стадии морулы и бластоцисты. 1999 год ознаменован успехами австралийских репродуктологов в достижении первой в мире беременности после витрификации ооцитов человека.

Сегодня витрификация - это реальная альтернатива медленным методам криоконсервации, доказавшая высокую клиническую эффективность циклов с размороженными ооцитами и эмбрионами человека. Одним из наиболее успешных методов витрификации является Cryotop-метод доктора М.Kuwayama. Cryotop состоит из тонкой полипропиленовой полоски, прикрепленной к пластиковой ручке и снабжен защитным колпачком для хранения в жидком азоте (см рис.1: «Cryotop: полипропиленовый стрип (a); ручка (b); защитный колпачок (c)»). Эмбрионы в минимальном объеме витрификационного раствора (<0,1 мкл) помещают на криотоп и немедленно погружают в жидкий азот (см рис. 2: «Cryotop: микрокапля витрификационного раствора с эмбрионом (а); удаление лишней жидкости капилляром (b)»).

Выживаемость эмбрионов всех стадий развития от зиготы до бластоцисты, витрифицированных Cryotop-методом, приближается к 100%. Эта технология используется сегодня более чем в 800 центрах в 40 странах.

Криоконсервация ооцитов

Трудно переоценить возможности Cryotop-метода в клинической практике для витрификации ооцитов человека. Криоконсервация ооцитов человека проводится по следующим показаниям:

Медицинские:

  • Планирующееся оперативное лечение органов малого таза,
  • Эмболизация маточных артерий,
  • Сохранение фертильности у пациенток со злокачественными заболеваниями.

Связанные с проведением вспомогательных репродуктивных технологий:

  • Создание банка донорских ооцитов,
  • Минимизация риска синдрома овариальной гиперстимуляции,
  • Накопление ооцитов у пациентов с низким ответом на стимуляцию,
  • Сохранение избыточных ооцитов после овариальной стимуляции (при запрете на криоконсервацию эмбрионов в ряде стран),
  • Моральные и этические проблемы, связанные с криоконсервацией и хранением эмбрионов,
  • Юридические и правовые аспекты при разводе супружеской пары, имеющей криоконсервированные эмбрионы.

Социальные:

  • Отсроченные репродуктивные планы (возможность сохранить «молодые» ооциты для более позднего их использования).

Первый ребенок после витрификации-отогревания ооцитов этим методом родился в Японии в 2002 году, в США в 2003 году. На сегодняшний день по совокупности публикаций более 2.000 здоровых детей родилось после витрификации ооцитов, благодаря методу М.Kuwayama. Необходимо отметить, что Cryotop-метод – не только эффективная, но и безопасная техника витрификации ооцитов и эмбрионов на всех стадиях их развития.

В течение 10 лет клинического применения метода (более 500.000 клинических случаев) не отмечено ни одного случая вирусной контаминации в процессе хранения в жидком азоте. Высокая выживаемость создает условия для размораживания меньшего количества эмбрионов, что, в свою очередь, увеличивает число криоциклов, которые можно выполнить после однократного получения ооцитов в цикле контролируемой овариальной стимуляции. Тем самым витрификация потенциально увеличивает кумулятивную частоту беременности и является более дружественной для пациентов технологий.

Криоконсервация спермы

Сперматозоиды человека успешно замораживают уже несколько десятилетий. В 50-е годы 20 века рождение здоровых детей в результате применения метода искусственного оплодотворения как нативной, так и криоконсервированной спермой привели к широкому и быстрому внедрению данного метода в медицинскую практику. Создать оптимальные условия для криоконсервации спермы возможно при использовании программных замораживателей с помощью компьютерных программ. Однако в мире вспомогательных репродуктивных технологий наибольшее распространение получил более простой способ охлаждения спермы в парах жидкого азота.

При этом методе сперму предварительно смешивают с консервантом при комнатной температуре, а затем помещают в специальные контейнеры: пластиковые соломинки, ампулы или криопробирки. Контейнер выдерживают при температуре 4°С в течение 15-30 мин, помещают в пары жидкого азота на 20-30 мин и затем погружают в него для дальнейшего хранения.

Существует целый ряд показаний для криоконсервации спермы.

Прежде всего – это необходимость сохранение биологического материала при проведении диагностических и лечебных процедур (TESA, PESA, реконструктивные микрохирургические операции мужского полового тракта, химио- и лучевая терапия при онкозаболеваниях, гормональное лечение, двусторонняя вазэктомия). Высокий профессиональный риск для репродуктивного здоровья возникает и при работе в условиях контакта с органическими и неорганическими веществами, высоких и низких температур, при воздействии ионизирующих и электромагнитных излучений.

Создание банков криоконсервированной донорской спермы – необходимое условие для проведения искусственной инсеминации или ЭКО у бесплодных супружеских пар. Однако для пациентов с тяжелой патозооспермией или небольшим объемом эякулята традиционные методы замораживания не всегда подходят из-за высокой вероятности потери сперматозоидов при разбавлении растворами криопротекторов и центрифугировании после размораживания. Форсированное развитие витрификационных носителей малого объема способствовало их использованию не только для ультрабыстрого замораживания эмбрионов и ооцитов, но так же и для спермы.

Размораживание витрифицированных сперматозоидов проводят непосредственно в микрокаплях среды с последующей их инкубацией при 37°C и 5% CO2 до момента использования. Процедура позволяет максимально сохранить единичные сперматозоиды даже при проведении вазоэпидидимостомии. Достижения в области ВРТ, внедрение метода ИКСИ в практику лечения мужского бесплодия позволили успешно использовать даже неподвижные, но жизнеспособные сперматозоиды для оплодотворения яйцеклеток человека и значительно расширили показания для криоконсервации спермы.

Таким образом, криоконсервация гамет и эмбрионов создает уникальные возможности для выполнения многоплановых программ по лечению бесплодия, имеет большое значение для будущего репродуктивной медицины и повышения клинической эффективности ВРТ.


Врач:  Хилькевич Людмила Викторовна
Добавить комментарий

Комментарии (3)

Загрузить изображение
O17.10.2018 11:37:40

Катерина

Цитата
Стрекоза пишет:
Дорогие женщины, если остаются хорошие эмбрионы в протоколе ЭКО, старайтесь сделать криоконсервацию. У нас первый протокол оказался пролетным, но потом сразу перенесли эмбриончики, которые мы заморозили, и я забеременела. Так я избежала повторной пункции, чему несказанно рада. Да и по стоимости намного выгоднее.
Поддерживаю Стрекозу на 100%. Если даже делаете ЭКО по квоте или ОМС, а там не предусмотрена криоконсервация эмбрионов, то лучше самой заплатить, чем проходить весть процесс снова, снова и снова. У меня первое ЭКо неудачное, а вот после криопротокола родила. В Криотоп до сих пор хранятся оставшиеся 2 соломинки по 2 эмбриона, так как пойду обязательно еще на одно эко. Криопротокол протекает проще и для здоровья безопаснее. Нет изнуряющей гормональной стимуляции, извлечения ооцитов, так как эмбриончики уже есть. Тем более, что хранение эмбрионов сейчас недорогое. В клиниках еще цены ломят, а вот в криобанках минимум в 2 раза дешевле выходит.
Имя Цитировать 0
O21.10.2013 13:22:18

Стрекоза

Дорогие женщины, если остаются хорошие эмбрионы в протоколе ЭКО, старайтесь сделать криоконсервацию. У нас первый протокол оказался пролетным, но потом сразу перенесли эмбриончики, которые мы заморозили, и я забеременела. Так я избежала повторной пункции, чему несказанно рада. Да и по стоимости намного выгоднее.
Имя Цитировать 0
O12.09.2013 13:21:40

Тося

Нужно смотивировать мужа сдать анализы и сперму на криоконсервацию, пока молодой. Мало ли что, а сперма сохранена. Учитывая то, что беременеть мы пока особо не торопимся, очень удобно было бы заморозить немного на будущее.
Имя Цитировать 0

© Портал о репродуктивном здоровье "Ждём ребёнка!" 2012-2020

Свидетельство о регистрации СМИ. Эл № ФС77-55050 от 14.08.2013 г.

Использование материалов Портала о репродуктивном здоровье "Ждём ребёнка!" возможно только с указанием источника в виде активной индексируемой гиперссылки на www.wait-kids.ru (в соответствии со статьей 1274 Гражданского кодекса РФ).

Вход на сайт

Войти как пользователь:
Войти как пользователь
Вы можете войти на сайт, если вы зарегистрированы на одном из этих сервисов:

Регистрация

Логин (мин. 3 символа):

Пароль:

Подтверждение пароля:

Адрес e-mail:

Фотография:

CAPTCHA
Введите код с картинки: